【摘要】 目的 观察重组人表皮生长因子（rhEGF）、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及氧氟沙星3种滴眼液对角膜上皮损伤修复的影响。 方法 选择60例60眼施行穿透性角膜移植术的患者。术中去除供体角膜上皮细胞并按随机单盲原则将60例患者分为3组：rhEGF组20例，bFGF组20例，氧氟沙星组20例。分别按常规方法予以治疗并随访7天。在24、36、48、60、72h、4、5、6、7d时，记录角膜上皮恢复情况，并对疗效进行统计学分析。 结果 24h、5d和6d时，rhEGF组、bFGF组和氧氟沙星组疗效差异无显著性（P>0.01）。36、48、60、72h时，rhEGF组、bFGF组和氧氟沙星组疗效差异有显著性（P<0.01）。rhEGF组和bFGF组疗效差异均无显著性（P>0.01）。 结论 rhEGF和bFGF可缩短角膜上皮损伤修复所需的时间，有促进角膜上皮损伤修复的作用。

【关键词】表皮生长因子  角膜  上皮细胞   角膜移植

 

A Randomized Control Trial: Recombinant Human Epidermal Growth Factor Drops Rehabilitating Corneal Epithelium Defect

XU Jian-Jiang, GONG Lan, SUN Xing-Huai

[Abstract] Objective: To evaluate the effectiveness of recombinant human epidermal growth factor(rhEGF), basic fibroblast growth factor(bFGF) and ofloxacin rehabilitating corneal epithelium defect. Methods: 60 patients (60 eyes) were enrolled in this randomized control trial, who underwent the penetrating keratoplasty with removing the corneal epithelium and then were random divided into three groups: rhEGF group, bFGF group and ofloxacin group. Each group were administrated the medicine in he routine way and followed six days. The situation of corneal epithelium were recorded at 24h, 36h, 48h, 60h, 72h, 4d, 5d ,6d and 7d point respectively. Curative effect were compared. Results :Statistical difference between rhEGF group and ofloxacin group and between bFGF group and ofloxacin group were not significant at 24h, 5d or 6d point(P>0.01). However, they were significant at 36h, 48h, 60h, or 72h(P<0.01). At the same time, there was not statistical difference between rhEGF group and bFGF group. Conclusion: rhEGF and bFGF can reduce the time of corneal epithelium rehabilitating and be of benefit to the ocular surface injury recovering.

【Key words】Epidermal growth factor  Cornea  Epithelium  Kerotoplasty

 

1986年，世界科学界最著名的诺贝尔奖评审委员会，将该年度的生命科学领域的最高荣誉━━诺贝尔生理学和医学奖，授予了美国科学家Cohen. S教授和Levi. Montalcini教授，表彰他们在发现和研究表皮生长因子 ( Epidermal Growth Factor， EGF )方面所做出的杰出贡献，同时也揭示了EGF是创伤愈合和组织修复过程中不可或缺的因素。本试验是重组人表皮生长因子对角膜上皮细胞损伤修复的临床疗效的研究。

 

一、病例选择：本研究选择结膜及角膜缘干细胞无异常、泪膜功能正常的角膜移植病例60例60眼。男性36例，女性24例，年龄14－54岁，平均34.7岁。选择角膜炎后角膜白斑27例，穿孔伤后角膜白斑13例，圆锥角膜9例，大泡性角膜病变7例，角膜营养不良4例。

二、手术方式:60例角膜病患者均采用穿透性角膜移植术。本实验术前供体植片均去除角膜上皮细胞，使角膜移植片上皮完全去除。角膜移植片均为7.5mm，移植孔7.25mm，角膜用10－0尼龙线间断缝合16针。术毕结膜囊内滴入rhEGF滴眼液2滴20例，结膜囊内滴入bFGF2滴20例，结膜囊内滴入氧氟沙星滴眼液2滴20眼，单眼包扎，24小时后开始滴药。

三、病例设计:将研究病例按单纯随机抽样（数字表法）、单盲方法分为3组：rhEG组20例，bFGF组20例，氧氟沙星滴眼液组20例。各组年龄、性别、病因经检验无显著性差异，并按入选标准选择研究病例。

四、药物及用药方式：应用深圳市华生元基因工程发展有限公司的金因舒（rhEGF）滴眼液，保存条件：4－25^。C，术毕结膜囊内滴眼2滴，以后每日4次，每次滴眼2滴；贝复舒（bFGF）由珠海东大制药有限公司提供，规格：12000AU/5ml，保存条件：4－8^。C，术毕结膜囊内滴眼2滴，以后每日4次，每次滴眼2滴；对照组，泰利必妥(氧氟沙星)滴眼液由日本参天制药有限公司提供，规格：0.3%氧氟沙星滴眼液，术毕结膜囊内滴眼2滴，以后每日4次，每次滴眼2滴。

五、观察指标：裂隙灯检查，观察角膜移植片上皮缺损区的大小，观察时间为术后24、36、48、60、72h、4、5、6、7d直至角膜上皮完全愈合。

六、疗效标准：参照林跃生等^【1】的评判标准进行疗效判定。根据角膜移植片上皮缺损区的愈合情况将病例的临床疗效分为四级记录。①痊愈：角膜移植片上皮缺损区完全愈合；②显效：角膜移植片上皮缺损区大部分愈合，角膜移植术后角膜移植片上皮缺损区直径小于3mm；③有效：角膜移植术后角膜移植片上皮缺损区直径3－6mm；④无效：角膜移植术后角膜移植片上皮缺损区直径大于6mm。

七、统计学处理方法：采用SPSS 13.0对研究结果进行分析。运用方差分析检验各组年龄。运用卡方检验分析各组性别和病因。运用秩和检验分析不同治疗方案之间的疗效差别,多组比较采用Kruskal－Wallis检验，两组之间比较则Nemenyi法检验。

 

一、疗效观察：

60例患者均予治疗并随访7天。观察结束时，所有患者症状缓解，角膜上皮缺损区均完全愈合。三种治疗方案的疗效观察情况见表1～表3。

二、不同治疗方案疗效分析（表4）

1、  各组患者年龄、性别、病因经检验均无统计学意义，P<0.01。

2、  多组之间疗效比较：24h、5和6d时，差异无显著性（P>0.01）。36、48、60和72h时，差异有显著性（P<0.01）。

3、  rhEGF组和bFGF组疗效比较：各观察时间点差异均无显著性（P>0.01）。

4、  rhEGF组和氧氟沙星组疗效比较：24h、5和6d时，差异无显著性（P>0.01）。36、48、60和72h时，差异有显著性（P<0.01）。

5、  bFGF组和氧氟沙星组疗效比较：24h、5和6d时，差异无显著性（P>0.01）。36、48、60和72h时，差异有显著性（P<0.01）。

三、安全性

所有患者随访期间均未出现感染、过敏等其他不良反应。

 

角膜损伤后的修复过程就是角膜细胞的分化、增殖、分泌、移行的过程，在损伤修复的过程中周围的组织或细胞以自分泌或旁分泌的方式释放出多种内源性细胞因子，如EGF、bFGF、PDGF、TGF-ß等，这些细胞因子对角膜的损伤修复起着重要的调节作用^【2，3】。

EGF是60年代由Cohen 和 Montalcini 研究鼠神经生长因子时发现的一种多肽因子^【4】。EGF是一种能广泛刺激细胞增殖的生物活性物质，具有刺激上皮细胞增生，加快愈合的作用。EGF广泛存在于人体的多种组织和体液中。EGF能促进角膜上皮细胞的增殖是由于EGF与角膜上皮细胞表面的EGF受体结合形成复合体，促进角膜上皮细胞摄取DNA、RNA和标志蛋白前体，促进细胞的有丝分裂，使细胞数量增加^[5]。角膜上皮细胞具有较丰富的EGF受体，且对EGF具有较强的亲和力，因此，EGF能明显促进角膜上皮细胞的增殖和移行。

碱性成纤维细胞因子（bFGF）是一种微量蛋白，对多种中胚层和神经外胚层来源的细胞均有促进分裂增殖的作用。bFGF在正常角膜组织中以无或低活性的形式存在于细胞间质中，对角膜上皮、基质、内皮的修复均有促进作用。但成纤维细胞和血管内皮细胞上的FGF受体数量较多，因此FGF长期使用会导致瘢痕组织和毛细血管增生^【2】。

本研究表明，rhEGF 和bFGF对角膜损伤修复均具有显著的促进作用。3组之间疗效比较：24h、5和6d时，差异无显著性（P>0.01）。但36、48、60和72h时，差异有显著性（P<0.01）；rhEGF组和bFGF组疗效比较：各观察时间点差异均无显著性（P>0.01）；rhEGF组和氧氟沙星组疗效比较：24h、5和6d时，差异无显著性（P>0.01）。36、48、60和72h时，差异有显著性（P<0.01）；bFGF组和氧氟沙星组疗效比较：24h、5和6d时，差异无显著性（P>0.01）。36、48、60和72h时，差异有显著性（P<0.01）。 因此，rhEGF和bEGE对治疗角膜上皮损伤是有效的。人表皮生长因子是促进眼表组织细胞移行、分裂、增殖的因子，在眼表损伤的愈合过程中发挥关键性的作用。创伤后局部补充外源性人表皮生长因子，则能促进眼表组织细胞的生长，加速眼表损伤的愈合。

金因舒的主要活性成分rhEGF与眼表组织靶细胞膜表面的rhEGF特异性受体（rhEGFR）结合，激活受体细胞膜内的酪氨酸激酶（TK），并通过细胞内信号反应系统引起一系列生物化学、分子生物学级联反应，主要表现在：增加细胞膜及亚细胞膜上的物质转运（如：Na+和H-的逆向转运、Ca2+从钙库释放到细胞浆中等）；促进糖酵解作用；促进RNA、DNA的合成；促进细胞外大分子物质（如羟脯氨酸、透明质酸、胶原蛋白等）的合成；最终促进细胞进行趋化、分裂、增殖等组织修复、重建所需的生物学反应。rhEGF的药理学作用：①趋化作用 rhEGF促进眼表角结膜上皮细胞、角膜内皮细胞等多种细胞向损伤部位移动，缩短眼表损伤愈合时间；②增殖作用 rhEGF可促进眼表组织细胞有丝分裂和胞外基质合成，加速眼表损伤愈合；③重建作用 rhEGF通过调节胶原的降解与更新，使胶原以线形方式排列，增强角膜抗张强度，减少角膜瘢痕和新生血管网的形成。由于rhEGF的这些作用临床上不只用于角膜损伤的修复，还被用于各种原因引起的角膜上皮缺损，包括角膜机械性损伤、各种角膜手术后、轻度干眼症伴浅层角膜病变、轻度化学烧伤等。

 

参考文献

1.       林跃生，王敏华，陈家琪等.中国实用眼科杂志 2000，18：700

2.       钟一声，程枫，王康孙.五种生长因子mRNA在兔角膜中的表达【J】.上海第二医科大学学报2002，20：302－304。

3.       Grant MB,Khaw PT, Schultz GS,Adams JL,Shimizu RW. Effects of epidermal growth factors, fibroblast growth factors, and transforming growth factor-beta on corneal cell chemotaxis[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci 1992,33:3292-3301.

4.       Hamburger V. The history of the discovery of the nerve growth factor[J]. J Neurbiol,1993,24（7）：893－897.

5.       Brightwell JR. Biosynthetic human EGF accelerates heal of nendecadron treatexl primatic corneas [J]. Invest Ophthalmal Vis Sci, 1985,26(1):105-111.